核酸提取過程中DNA酶解步驟是引起RNA降解或丟失的最常見原因之一。酶解反應(yīng)一般在硅膠離心柱上進(jìn)行，這對離心柱式核酸提取來說是一種節(jié)省時(shí)間的好方法，但對富含DNA的樣品而言就不那么有效率了（比如脾臟，胸腺，甚至某些土壤樣品），這種情況下，需要在溶液中對DNA進(jìn)行酶解。

經(jīng)典的DNA酶解程序最后一步涉及加EDTA或者加熱滅活酶，這兩種方式都會(huì)影響RT-PCR結(jié)果：EDTA會(huì)抑制RT-PCR酶的活性，加熱會(huì)導(dǎo)致RNA完整性受損。另外，大部分DNA酶需要冷凍保存并且多管分裝以避免多次凍融降低酶活性。

我們推出了一套能全程保護(hù)RNA的酶解體系：DNase Max

DNase Max：是一種可在室溫下穩(wěn)定保存的高活性（1ul酶能在20分鐘內(nèi)消化30ugDNA）DNA酶溶液。最強(qiáng)大的部分是清除DNA酶這一步。DNA酶和陽離子被一種強(qiáng)特異性的樹脂吸附而從RNA樣品中清除，無需添加酶抑制劑或者加熱，終產(chǎn)物可直接用于qRT-PCR。與競爭性試劑盒比較，該樹脂非常高效，單次反應(yīng)能完全去除10個(gè)單位DNA酶（如下圖，3-4泳道），而競爭試劑盒僅能去除2單位DNA酶（如下圖，1-2泳道）。

這意味著幾個(gè)小時(shí)的工作過程中你都能很好的保護(hù)你的珍貴RNA，最終得到更準(zhǔn)確的基因表達(dá)分析結(jié)果。

DNase Max去除樹脂完全去除DNA酶

RNA樣品分別由DNase Max™ 試劑盒和競爭對手的試劑盒進(jìn)行DNA消化以及DNase去除。操作嚴(yán)格按照官方說明書進(jìn)行。通過MO BIO 的DNase-free認(rèn)證辦法，對DNase殘留活性進(jìn)行分析。條帶5為陰性對照，不使用DNase。所有樣品37℃孵育1h，65℃ 5min滅活。1%瓊脂凝膠電泳展示如圖，DNase Max去除樹脂成功地去除掉所有DNase（條帶3-4），而競爭對手產(chǎn)品的樹脂并不能完全去除樣品中的所有DNase（條帶1-2）。

保護(hù)RNA的其他產(chǎn)品

無論什么來源的樣品，RNA的提取從來都是不容易的，尤其是樣品有限或者不可替代的時(shí)候。因?yàn)镽NA不穩(wěn)定，所以操作小心快速很關(guān)鍵。有很多方法可以在操作中保護(hù)起到RNA的作用，使你操作起來更加輕松而不必焦慮。

用BME、均勻快速地研磨和使用帶清除樹脂并且經(jīng)認(rèn)證不含RNA酶的DNA酶將成為你成功提取任意樣品RNA的小技巧。此外，要去除工作臺(tái)和設(shè)備上的核酸酶，應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室清潔噴霧（12095）十分有效，經(jīng)認(rèn)證不含RNA酶的手套（1556）的使用也能提供極大的幫助，在我們的實(shí)驗(yàn)室，這些都是必不可少的。