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產品特點

• 強力裂解 - 采用優化的珠磨研磨方法，可高效裂解真菌、革蘭氏陰性菌及革蘭氏陽性菌細胞并溶解菌體總蛋白
• 快速簡便提取總蛋白 - 新型離心柱方法提取蛋白質過程無需沉淀，全程僅需22 min
• 結果精確 -所得蛋白質可用于質譜分析、一維和二維電泳、以及其他蛋白組學相關應用

描述

NoviPure™ Soil Protein Extraction Kit專門設計用于所有類型土壤微生物胞外、胞內蛋白提取，不受腐殖質等干擾雜質影響。正在申請專利的雙緩沖液提取法加上玻璃珠、陶瓷研磨珠能高效裂解細胞，并溶解所有胞外、胞內蛋白質。相對于SDS水煮、熱蒸汽與NaOH結合等傳統提取方法，最終蛋白沉淀非常干凈不含雜質。加入緩沖液重懸蛋白沉淀后可用于進一步分析或保存。使用NoviPure™ Soil Protein Extraction Kit提取的蛋白質已經成功地在一維電泳和質譜分析法（2D LC-MS/MS）中使用。為保護珍貴樣品，所有試劑及塑料制品都不含任何蛋白酶或蛋白。試劑盒說明書專門優化提取變性蛋白，要提取天然蛋白只需對操作流程進行少許修改即可。

研究與深入

圖1：使用NoviPure™ Soil Protein Extraction Kit提取堆肥樣品獲得更干凈的蛋白質

(A) NoviPure™ Soil Protein Extraction Kit試劑盒法（條帶1、2）與蔗糖、苯酚提取法①（條帶4、5）分別提取兩個加入白念球菌（C. albicans)的5g預先滅菌堆肥樣品總蛋白。NoviPure™ Soil Protein Extraction Kit（條帶3）與蔗糖、苯酚法（6）再提取白念球菌（C. albicans）純培養作為對照。

（B） NoviPure™ Soil Protein Extraction Kit試劑盒法（條帶1、2）與SDS煮沸提取法（條帶3、4）分別提取兩個加入大腸桿菌（E. coli)的5g預先滅菌堆肥樣品總蛋白。

每樣取20μl總蛋白跑一維SDS-PAGE電泳，Stain Free凝膠成像系統③可視化處理。NoviPure™ Soil Protein Extraction Kit所獲得的蛋白背景清晰無拖尾，可見蛋白條帶。可見腐殖質等干擾雜質非常少。

圖2：使用NoviPure™ Soil Protein Extraction Kit提取復雜類型土壤樣品獲得高蛋白質得率

使用NoviPure™ Soil Protein Extraction Kit提取加入了大腸桿菌（E. coli）的5g預先滅菌土壤及沉積物的總蛋白。每樣取20μl總蛋白跑一維SDS-PAGE電泳，Stain Free凝膠成像系統③可視化處理。所有樣品都能獲得清晰蛋白條帶，并與大腸桿菌純培養陽性對照相符。（條帶1、2）- 淡水湖沉積物；（3、4）- 瀉湖沉積物；（5、6）- 沙灘沙子；（7、8）- 大田土壤；（9、10）- 大腸桿菌純培養。

圖3：使用NoviPure™ Soil Protein Extraction Kit提取的蛋白質在二維凝膠電泳中獲得成功結果

使用NoviPure™ Soil Protein Extraction Kit提取加入了大腸桿菌（E. coli）的5g預先滅菌土壤及沉積物的總蛋白。每樣取20μl總蛋白，pH3-10 二維SDS-PAGE電泳后銀染分析。可見蛋白質清晰可見無腐殖質等干擾物。

圖4：使用NoviPure™ Soil Protein Extraction Kit提取的蛋白質在2D LC - MS/MS中獲得精確的結果

蛋白質質譜峰圖。為強陽離子交換分離后的一部分。由NoviPure™ Soil Protein Extraction Kit 提取5g加入E. coli滅菌堆肥的總蛋白，胰蛋白酶酶解成肽段，再對這些肽段用2D-MS/MS進行鑒定與分析。原色譜比對SWISSPRO數據庫（最新版本2013年5月）。結果鑒定出1076種不同蛋白。

①Taylor & Williams, 2013 Microb. Ecol. 59:390-99

②Chourey et al. 2010 J. Proteome Res. 9:6615-22

③BIORAD mini PROTEAN® TGX Stain-Free™ Gels

規格

提取方法	專利申請中的雙緩沖液提取法
細胞破碎	研磨珠破碎
處理樣品量	2-5g
儀器要求	渦旋混合儀 適配器(50ml) 50ml 管離心機(4500×g） 小型離心機（20000×g）

保存條件

室溫（15-30℃）保存。SP1和SP2溶液使用前先冷藏。

試劑盒組分

組分	30000-20
NoviPure™ Bead Tubes Solution SP1 Solution SP2 50ml Falcon™ Collection Tubes 1.7ml Low-Protein Binding Tubes	20 500ml 32ml 40 20

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